Introduction à la cytométrie en flux 
La cytométrie en flux (CMF) est une
technologie polyvalente, qui permet de quantifier la fluorescence et les
caractéristiques structurelles des particules (le plus souvent des cellules).
Les analyseurs CMF permettent une analyse quantitative rapide des particules en
suspension ou des protéines solubles provenant de sérum, de cellules
fractionnées, de cellules trypsinisées ou de tissus dissociés. Les chercheurs
et les cliniciens peuvent obtenir plusieurs statistiques au niveau d'une seule
cellule et d'une population. Les trieurs de cellules peuvent également analyser
les particules et, en outre, séparer physiquement les cellules d'intérêt à un
niveau de pureté élevé pour les essais en aval. Une liste non exhaustive des
différents tests de cytométrie en flux est fournie en bas de page.
Un cytomètre en flux se compose de trois
éléments principaux : la fluidique, l'optique et l'électronique. Grâce à un
contrôle exquis de la pression et à une conception précise de la cellule
d'écoulement ou de la buse, le système fluidique concentre l'échantillon de
manière hydrodynamique et aligne les cellules en file indienne. Les cellules
traversent ensuite le cœur du système, le point d'interrogation, où le système
fluidique rencontre le système optique.
L'optique est composée de modules d'excitation
et de collecte de la lumière. Au point d'interrogation, des lasers sont
utilisés pour balayer chaque cellule l'une après l'autre afin d'évaluer leurs
paramètres physiques et de fluorescence. La quantité de lumière diffractée en
ligne avec le laser (Forward Scatter ; FSC) fournit une indication de la taille
et la diffraction du laser à environ 90o (Side Scatter, SSC) fournit
une indication de la complexité ou de la granularité des cellules. En outre,
les cellules peuvent être marquées avec des protéines rapporteuses, des
colorants fluorescents ou des anticorps marqués par fluorescence, qui marquent
sélectivement les cellules d'intérêt. Ces ensembles de marqueurs ou panneaux de
couleurs doivent être soigneusement choisis pour être excités par la source de
lumière d'excitation disponible (lasers) et émettre une fluorescence à une
longueur d'onde d'émission de la lumière qui est distinctement collectée par
les filtres passe-bande disponibles.
Les composants électroniques tirent parti des
photodiodes et des tubes photomultiplicateurs (PMT) ultrasensibles pour
convertir la lumière, définie par les filtres passe-bande, en impulsions
électroniques. Ces impulsions sont intégrées, numérisées et envoyées à la
station d'acquisition, où les données peuvent être interprétées.
L'avantage d'utiliser la CMF est que c'est un
système extrêmement rapide et qu'une quantité relativement faible d'échantillon
est nécessaire. De plus, dans la CMF multiparamétrique, plusieurs paramètres ou
couleurs de fluorescence sont analysés simultanément. Nous pouvons par exemple
identifier le phénotype et vérifier la viabilité, la vitalité, la capacité
proliférative et l'état du cycle cellulaire de chaque cellule. Par conséquent,
comme des milliers de cellules peuvent être analysées rapidement, nous pouvons
identifier des populations cellulaires extrêmement rares et obtenir des
statistiques de population avec une plus grande précision.
Applications de la cytométrie en flux (liste non
exhaustive) :
Apoptose
Autophagie
Flux calcique
Signalisation cellulaire
Tri cellulaire
Suivi des cellules
Viabilité des cellules
Clonage
Détection de molecules solubles
Analyse de l'ADN/du cycle cellulaire
Immunophénotypage
pH intracellulaire
Détection de protéines intracellulaires
Potentiel membranaire
Phagocytose
Prolifération
Efficacité de la transfection/transduction